الاليزا ELISA

يعتبر من الاختبارات المهمه
يتم في plate والفكره تقوم على أن نضيف الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم الي الانتجين ونعمل غسيل
[+] اذا تم الارتباط antigen antibody reaction الغسيل لايوثر على الارتباط و يظلوا مرتبطين
الخطوة التانيه نضيف مادة تفاعلsubstrate يعمل عليها الأنزيم ويغير لونها
[+] تكون الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم مرتبطة بالانتجين بالتالي الأنزيم موجود فعند اضافه substrate يغير اللون
[_] تكون الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم غير مرتبطة بالانتجين وعند الغسيل (بمادة غسيل) يتم التخلص منهم وعند إضافة substrate لا يحدث تغير في اللون لانه الأنزيم غير موجود
ببساطه لو في الأنزيم حيشتغل على مادة التفاعل ويغير لونها لو ما في ما حيحصل تغير
يلا بكون موجود الانزبم متين ؟
لمن يكون حدث تفاعل بين الانتجين والاجسام المضادة بالتالي ماده الغسيل ما حتستطيع انه تتفكفكهم وتتخلص منهم
مهمه ماده الغسيل من كل الانتجين والاجسام المضادة اذا غير مرتبطه
زي ما قلنا في الأول انه التفاعل بين الانتجين والاجسام المضادة antigen antibody reaction غير مرئي
و فكره الاختبارات المناعبه انه عايزين حاجه مرئيه نعرف بيها حصل تفاعل ولا لا

يوجد نوعين من اختبار الاليزا
مباشر
غير مباشر
اختبار الاليزا المباشر direct :-
يتم به الكشف عن الانتجين
المتطلبات :-
1- بليت مغطى بالانتجين PLATE coated by antigen يتم تحضيره بطريقه معينه (يوضع الانتجين المراد معرفته في PLATE قاعدته flat )
2- أجسام مضادة معلمه بالانزيم (دي بتكون جاهزة)
antibody linked by
enzyme
3- مادة التفاعل substrate
4- مادة الغسيل
5- ماده إيقاف التفاعل stop
طريقة الاختبار :-
يتم أضافه الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم في البليت المغطى بالانتجين ويترك فتره معينه في درجه حراره 25 م ( incubation )
بعدها يتم الغسيل بمادة الغسيل لكي يتخلص من الأشياء غير المرتبطة وتبقى الأشياء المرتبطه
بعد الغسيل يتم التجفيف جيدا
بعدها يتم أضافه substrate لفتره محددة
الخطوة الاخيره إضافة stop لوقف التفاعل (لكي لا يواصل التفاعل ويغير اللون اكتر من اللازم ويعطي نتيجه خاطئه )
لمعرفة النتيجه+ أو –
يمكن بالعين المجردة حيث يتغير اللون في العينات الموجبة (لحدوث التفاعل بين الأنزيم ومادة التفاعل ) . بينما لا يتغير اللون في العينات السالبة
لمعرفه كمية الانتجين titre
يوضع الPLATE في جهازreader يقرأ الطول الموجي للألوان ويعطي أرقام يتم حسابها بطريقه معينه
اختبار الاليزا المباشر
يمكن أن يتم به الكشف عن الأجسام المضادة
المتطلبات

1- بليت مغطى بانتجين معروف PLATE coated b antigen (يوضع الانتجين المعروف في PLATE قاعدته flat )
2- عينات الدم المراد فحصها الفكره(معرفه اذا كانت تملك أجسام مضادة ولا لا)
2- أجسام مضادة معلمه بالانزيم (دي بتكون جاهزة)
antibody linked by
enzyme
3- مادة التفاعل substrate
4- مادة الغسيل
5- ماده إيقاف التفاعل stop
طريقة الاختبار :-
1-يتم إضافة عينات الدم المراد فحصها الي البليت المغطى بالانتجين المعلوم ويترك لفتره زمنيه محدده في درجه حراره 25م incubation
2- بعدها يتم الغسيل بمادة الغسيل (حيث يتم التخلص من كل من الأجسام المضادة والانتجين الغير مرتبطين ) ويتم التجفيف جيدا.
3-يتم أضافه الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم في البليت المغطى بالانتجين ويترك فتره معينه في درجه حراره 25 م ( incubation )
4-بعدها يتم الغسيل بمادة الغسيل لكي يتخلص من الأشياء غير المرتبطة وتبقى الأشياء المرتبطه
بعد الغسيل يتم التجفيف جيدا
5-بعدها يتم أضافه substrate لفتره محددة
6- الخطوة الاخيره إضافة stop لوقف التفاعل (لكي لا يواصل التفاعل ويغير اللون اكتر من اللازم ويعطي نتيجه خاطئه )
لمعرفة النتيجه+ أو –
يمكن بالعين المجردة حيث يتغير اللون في العينات السالبه
بعد إضافة الأجسام المضادة للانتجين ولم يتم الارتباط معناه لمن نغسل حيتم التخلص من الأجسام المضادة الغير مرتبطه
لمن تجي تضيف الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم الخاصه بهذا الانتجين حترتبط بيو لمن نغسل ما حتطلع مع ماده الغسيل لأنها مرتبطه
لمن نجي نضيف مادة التفاعل حتلقى الأنزيم يشتغل عليها ويغير اللون
لمعرفة النتيجه+ أو –
يمكن بالعين المجردة حيث لا يتغير اللون في العينات الموجبه
بعد إضافة الأجسام المضادة للانتجين ويتم الارتباط معناه لمن نغسل ما حيتم التخلص من الأجسام المضادة لأنها مرتبطه
لمن تجي تضيف الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم الخاصه بهذا الانتجين ما حترتبط بيو لانه مرتبط
لمن نغسل حتطلع مع ماده الغسيل لأنها غير مرتبطه
لمن نجي نضيف مادة التفاعل ما حتلقى الأنزيم يشتغل عليها ويغير اللون
‬: بعد الاستوب طوالي بناخد البليد للقرايه
الاليزا التنافسيه competitive ELISA
لانه تتنافس الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم و الأجسام المضادة(الموجودة في عينات السيرم )المراد فحصها في الارتباط بالانتجين
اذا ارتبطت المعلمه بالانزيم تغير اللون لأنها تتفاعل مع مادة التفاعل كدا النتيجه سالبه يعني ما في أجسام مضادة في السيرم للانتجين المعين
ولو ارتبطت الاجسام المضادة المراد فحصها مع الانتجين معناه الأجسام المضادة المعلمه بالانزيم ما حتلقى طريقه ترتبط مع الانتجين ويتم التخلص منها عند الغسيل بالتالي م يتغير اللون

متعلقات:

ما هو دعاء صلاة الحاجة المُُستجاب

لو خيروك الأسئلة المعاكسة

التزاوج في القطط

تستخدم يدك اليسرى , إذن أنت تتفوق على الآخرين بخمس خصال